Luận văn Nghiên cứu mối tương quan giữa mức độ biểu hiện của các gen A20, Otub1, Otub2, Cezanne và nồng độ các Cytokine viêm trên Bệnh nhân ung thư Bạch cầu

Nội dung tài liệu: Luận văn Nghiên cứu mối tương quan giữa mức độ biểu hiện của các gen A20, Otub1, Otub2, Cezanne và nồng độ các Cytokine viêm trên Bệnh nhân ung thư Bạch cầu

1. BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ----------------------------- Bùi Kiều Trang NGHIÊN CỨU MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA CÁC GEN A20, OTUB1, OTUB2, CEZANNE VÀ NỒNG ĐỘ CÁC CYTOKINE VIÊM TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ BẠCH CẦU LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội - 2021
2. BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ----------------------------- Bùi Kiều Trang NGHIÊN CỨU MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA MỨC ĐỘ BIỂU HIỆN CỦA CÁC GEN A20, OTUB1, OTUB2, CEZANNE VÀ NỒNG ĐỘ CÁC CYTOKINE VIÊM TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ BẠCH CẦU Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. Nguyễn Thị Xuân Hà Nội - 2021
3. Lời cam đoan Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu này là kết quả của cá nhân tôi. Số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là hoàn toàn trung thực, chính xác và chưa không trùng lặp với bất kỳ công trình nào đã công bố. Mọi thông tin nội dung tham khảo trong báo cáo đều được trích dẫn cụ thể, rõ ràng. Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về lời cam đoan trên.
4. Lời cảm ơn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Thị Xuân – Trưởng Phòng Hệ gen học miễn dịch, Viện Nghiên cứu hệ gen, người thầy – người chị đã tận tình hướng dẫn, dìu dắt, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình làm việc và hoàn thành luận văn. Thái độ làm việc chuyên nghiệp của chị đã truyền cảm hứng cho tôi và giúp tôi cải thiện bản thân mình rất nhiều sau thời gian thực tập này. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn đến anh Nguyễn Hoàng Giang, chị Đỗ Thị Trang trong phòng Hệ gen học miễn dịch đã nhiệt tình giúp đỡ và chỉ bảo cho tôi những kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình thực hiện luận văn. Qua đây tôi cũng xin cảm ơn các thầy cô của Học viện Khoa học và Công nghệ đã tạo điều kiện, giúp đỡ tôi rất nhiều để tôi hoàn thành luận văn này. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè đã luôn ủng hộ, khích lệ và động viên tinh thần tôi trong suốt quá trình học tập cũng như hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận văn Bùi Kiều Trang
5. Danh mục các ký hiệu và chữ viết tắt Chữ viết tắt Tên đầy đủ Tên tiếng Việt ALL Acute lymphocytic leukemia Bạch cầu dòng lympho cấp tính AML Acute myeloid leukemia Bạch cầu dòng tủy cấp tính ANOVA Analysis of Variance Phân tích phương sai cDNA Complement deoxyribonucleic DNA bổ sung acid CLL Chronic lymphocytic leukemia Bạch cầu dòng lympho mạn tính CML Chronic myeloid leukemia Bạch cầu dòng tủy mạn tính DEPC Diethyl pyrocarbonate DNA Deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic DUB Deubiquitinase dNTP Deoxynucleotide ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Xét nghiệm chất hấp thụ miễn assay dịch liên kết với enzym HRP Horseradish peroxidase IL-1β Interleukin-1β IL-6 Interleukin-6 M-MuLV Moloney Murine Leukemia Virus mRNA Messenger ribonucleic acid RNA thông tin
6. NF-κB Nuclear factor kappa-light-chain- enhancer of activated B OD Optical Density Mật độ quang học OTU Ovarian tumor Khối u buồng trứng qRT-PCR Quantitative reverse transcription Phản ứng tổng hợp chuỗi PCR polymerase sao chép ngược RIP-1 Tumor necrosis factor receptor- interacting protein-1 RNA Ribonucleic acid Axit ribonucleic SPSS Statistical Package for the Social Sciences STAT Signal transducer and activator of transcription TBE Tris-borate-EDTA TLR Toll-like receptor TMB 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine TNFR Tumor necrosis factor receptor TNF-α Tumor necrosis factor-α TRAF6 TNF receptor-associated factor 6 UV Ultra violet Tia cực tím ZnF Zinc finger Ngón tay kẽm
7. Danh mục các bảng Bảng 2.1: Các cặp mồi đặc hiệu cho phản ứng Realtime-PCR ...................... 28 Bảng 3.1: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen A20 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính..40 Bảng 3.2: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB1 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ......................................................................................................................... 42 Bảng 3.3: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB2 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ......................................................................................................................... 43 Bảng 3.4: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen Cezanne với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ......................................................................................................................... 44 Bảng 3.5: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen A20 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 45 Bảng 3.6: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB1 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 46 Bảng 3.7: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB2 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 48 Bảng 3.8: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen Cezanne với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 49 Bảng 3.9: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen A20 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính ...... 51
8. Bảng 3.10: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB1 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính 52 Bảng 3.11: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB2 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính 53 Bảng 3.12: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen Cezanne với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính 55 Bảng 3.13: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen A20 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy mạn tính .... 56 Bảng 3.14: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB1 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy mạn tính ......................................................................................................................... 57 Bảng 3.15: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB2 với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy mạn tính ......................................................................................................................... 59 Bảng 3.16: Tương quan giữa mức độ biểu hiện gen Cezanne với nồng độ của các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy mạn tính ......................................................................................................................... 60
9. Danh mục các hình vẽ, đồ thị Hình 1.1: Hình ảnh so sánh tế bào máu bình thường và bệnh bạch cầu ........... 9 Hình 1.2: Hình ảnh tế bào bạch cầu dòng lympho trong bệnh ALL .............. 11 Hình 1.3: Hình ảnh tế bào bạch cầu dòng lympho trong bệnh CLL .............. 12 Hình 1.4: Hình ảnh tế bào bạch cầu dòng tủy trong bệnh AML .................... 14 Hình 1.5: Sự hình thành nhiễm sắc thể Philadelphia ..................................... 15 Hình 1.6: Hình ảnh tế bào bạch cầu dòng tủy trong bệnh CML .................... 15 Hình 1.7: Cấu trúc của protein A20 ............................................................... 18 Hình 3.1: Ảnh minh họa điện di đồ sản phẩm RNA tổng số tách chiết từ mẫu máu bệnh nhân và người khỏe mạnh . 31 Hình 3.2: Biểu hiện mRNA của các gen A20, OTUB1, OTUB2 và Cezanne trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính (cột màu đen) và mẫu người khỏe (cột màu xám).................................................................................................. 32 Hình 3.3: Biểu hiện mRNA của các gen A20, OTUB1, OTUB2 và Cezanne trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính (cột màu đen) và mẫu người khỏe (cột màu xám).................................................................................................. 33 Hình 3.4: Biểu hiện mRNA của các gen A20, OTUB1, OTUB2 và Cezanne trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính (cột màu đen) và mẫu người khỏe (cột màu xám). ........................................................................................................ 34 Hình 3.5: Biểu hiện mRNA của các gen A20, OTUB1, OTUB2 và Cezanne trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy mạn tính (cột màu đen) và mẫu người khỏe (cột màu xám). ...................................................................................................... 35 Hình 3.6: Nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính. ..................................................................................... 36 Hình 3.7: Nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính. ................................................................................... 37
10. Hình 3.8: Nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy cấp tính. ............................................................................................ 38 Hình 3.9: Nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng tủy mạn tính. ........................................................................................... 39 Hình 3.10: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen A20 và nồng độ cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ........ 41 Hình 3.11: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB1 và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α, IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ......................................................................................................................... 42 Hình 3.12: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB2 và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ......................................................................................................................... 43 Hình 3.13: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen Cezanne và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho cấp tính ......................................................................................................................... 44 Hình 3.14: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen A20 và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 46 Hình 3.15: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB1 và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 47 Hình 3.16: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen OTUB2 và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 48 Hình 3.17: Sự tương quan giữa mức độ biểu hiện gen Cezanne và nồng độ các cytokine IL-6, TNF-α và IL-1β trên bệnh nhân bạch cầu dòng lympho mạn tính ......................................................................................................................... 50